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目的 建立血浆假血友病因子活化因数ELISA测定方法,测定正常人及病人血浆假血友病因子活化因数水平。
方法 利用骆马来源的抗-活化假血友病因子抗体(一抗),辣根过氧化物酶标记兔抗人假血友病因子多克隆抗体(二抗)建立双抗体夹心方法。随机选取正常人66例进行血浆假血友病因子活化因数的测定。使用GraphPad Prism 4软件,在达到良好线性回归的前提下计算各样本与标准血浆的曲线的斜率的比值(sample slope/NPP slope ),即血浆假血友病因子活化因数。再根据该比值的大小判断血浆假血友病因子的活化程度。
结果 双抗体夹心测定血浆假血友病因子活化因数方法的批内CV%分别是:4.21%,4.98%,6.32%;批间CV%分别是:6.34%,7.02%,7.69%。抗干扰实验显示:血清白蛋白、胶原蛋白、纤维蛋白原对本实验无干扰。正常人群血浆假血友病因子活化因数测定值为0.74±0.35,在性别间正常人群血浆假血友病因子、血浆假血友病因子活化因数差异均无显著性,P >0.05。在不同年龄组间,>40岁组血浆假血友病因子含量显著的高于<40岁组,P<0.001;而血浆假血友病因子活化因数在两年龄组间差异无显著性,P >0.05。
结论 双抗体夹心法测定血浆假血友病因子活化因数具有重复性好、特异性强等优点。它对于判断血液高水平假血友病因子时,假血友病因子的真实活化状态;分析引起血浆假血友病因子活化因数升高的机制及某些病理状态下,由于假血友病因子-血小板凝聚物的大量生成导致血小板减少症、血栓并发症的机制提供重要依据。
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